產品簡介:
熒光染料PKH67是一種可對外泌體進行熒光標記的新型染料,可以通過與外泌體膜結構的脂質分子結合而標記外泌體。PKH67熒光背景低,脂溶性高,能夠輕易穿透外泌體膜,有著強而穩(wěn)定的綠色熒光。經PKH67標記的外泌體可用于體外和體內研究,且具有不會使鄰近細胞染色的功能。PKH67標記外泌體的熒光非常均一,陽性標記率達98%以上,標記外泌體形態(tài)良好。 PKH67標記細胞呈綠色熒光,熒光波長:λex=490 nm, λem=502 nm。 可以提供細胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、細胞代謝、氧化應激、細胞膜流動性、膜通透性轉換孔、細胞耗氧率、細胞內pH、細胞粘附、細胞自噬等數百種檢測試劑盒產品。
儀器準備:
1.流式細胞儀/熒光顯微鏡/激光共聚焦
2.離心機
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
試劑準備:PBS緩沖液或者HBSS
耗材準備:
1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套
使用方法:
1. 試劑配制:從冰箱中取出PKH67試劑,靜置幾分鐘至室溫,或者37℃水浴片刻后,離心盛放PKH67的管子,開蓋前請務必離心幾分鐘讓試劑充分落入管底后才能開蓋。
2. 根據需要檢測的樣品數,用稀釋液將探針10倍稀釋,再用合適的溶液(如:無血清培養(yǎng)基,HBSS或PBS)25倍稀釋,配制成染色工作液。
3. 將制備好的待測外泌體樣本用20-100 μl染色工作液重懸。
4. 在室溫或37℃避光孵育5-30分鐘。
5. 將外泌體重新離心提取,用PBS洗滌一次。
6. 根據需要使用標記好的外泌體。
注意事項
1.PKH67熒光探針在2-8℃時是固體狀態(tài),從冰箱取出后恢復至室溫,變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
2.熒光染色劑為DMSO溶液,冬季氣溫較低時為凝固狀態(tài),極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱融解,變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋