保存溫度
2-8℃ 避光
注意事項
1.探針-20℃密封避光保存；
2.避免反復凍融。
3.注意防止氧化；
4.試劑拆封后請盡快使用完！
2.避免反復凍融。
3.注意防止氧化；
4.試劑拆封后請盡快使用完！
有效期
6個月
檢測方法
熒光酶標儀
適用樣本
細胞，分離的線粒體等
產(chǎn)品特點
1.廣泛適用于各種體外模型；不再局限于單層細胞，還能測定懸浮細胞、微生物和特定的 3D 培養(yǎng)物；
2.簡單的“混合-檢測”方案允許使用多種其他分析試劑盒進行多參數(shù)分析；
3.可逆轉(zhuǎn)，能夠觀察耗氧量的瞬態(tài)和長時間變化；
4.可適配多數(shù)熒光酶標儀以及標準 96 孔和 384 孔；
5.以高通量的形式方便地測量；
6.無需等待專用設(shè)備空閑所需的實驗室時間，也無需大額資金專用設(shè)備投入。
2.簡單的“混合-檢測”方案允許使用多種其他分析試劑盒進行多參數(shù)分析；
3.可逆轉(zhuǎn)，能夠觀察耗氧量的瞬態(tài)和長時間變化；
4.可適配多數(shù)熒光酶標儀以及標準 96 孔和 384 孔；
5.以高通量的形式方便地測量；
6.無需等待專用設(shè)備空閑所需的實驗室時間，也無需大額資金專用設(shè)備投入。
產(chǎn)品應(yīng)用
線粒體功能和細胞代謝研究
儀器準備
1.熒光酶標儀
須配備相應(yīng)的波長過濾器和溫度控制器。
2.離心機
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
須配備相應(yīng)的波長過濾器和溫度控制器。
2.離心機
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
試劑準備
PBS緩沖液或者HBSS
耗材準備
1.黑色透明底熒光專用96孔培養(yǎng)板
2.離心管
3.吸頭
4.一次性手套
2.離心管
3.吸頭
4.一次性手套
使用注意事項
1.螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體收集至管底，避免開蓋時液體灑落。
2.細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。
3.以下操作以96孔細胞培養(yǎng)板為例。其他培養(yǎng)容器或裝置請根據(jù)實際情況調(diào)整試劑用量和檢測方法。各試劑等比例調(diào)整即可。O2熒光探針終濃度25倍稀釋最佳。
4. R01探針的信號變化直接取決于所測量細胞類型的細胞呼吸速率，建議盡可能使用每孔高的細胞密度作為起點，并根據(jù)需要減少細胞數(shù)量。
5.并非所有細胞類型都消耗足夠用于檢測的氧氣。
6.必須使用熒光培養(yǎng)專用的透明底黑色培養(yǎng)板，減少檢測時各孔之間的光互相干擾。
7.用于測定的所有儀器試劑溶液耗材均需37℃預(yù)熱。
8.添加氧氣封閉液時注意避免產(chǎn)生氣泡。
9.盡可能使用多通道移液器添加試劑。
10.如果藥物有紅色熒光（如阿霉素等）需要換液，不含培養(yǎng)基和待測藥物，用HBSS或PBS體系檢測，在無血清無酚紅環(huán)境檢測。
11.建議設(shè)定FCCP處理的陽性對照樣本。
2.細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。
3.以下操作以96孔細胞培養(yǎng)板為例。其他培養(yǎng)容器或裝置請根據(jù)實際情況調(diào)整試劑用量和檢測方法。各試劑等比例調(diào)整即可。O2熒光探針終濃度25倍稀釋最佳。
4. R01探針的信號變化直接取決于所測量細胞類型的細胞呼吸速率，建議盡可能使用每孔高的細胞密度作為起點，并根據(jù)需要減少細胞數(shù)量。
5.并非所有細胞類型都消耗足夠用于檢測的氧氣。
6.必須使用熒光培養(yǎng)專用的透明底黑色培養(yǎng)板，減少檢測時各孔之間的光互相干擾。
7.用于測定的所有儀器試劑溶液耗材均需37℃預(yù)熱。
8.添加氧氣封閉液時注意避免產(chǎn)生氣泡。
9.盡可能使用多通道移液器添加試劑。
10.如果藥物有紅色熒光（如阿霉素等）需要換液，不含培養(yǎng)基和待測藥物，用HBSS或PBS體系檢測，在無血清無酚紅環(huán)境檢測。
11.建議設(shè)定FCCP處理的陽性對照樣本。
使用方法
關(guān)于儀器設(shè)置：
溫度對檢測有較大影響。有條件的話，務(wù)必使用配有溫度控制的酶標儀。
常規(guī)的熒光信號強度測量，使用基于單色儀或基于過濾器的酶標儀，最佳激發(fā)波長使用450-460 nm，發(fā)射波長使用586-600 nm�？筛鶕�(jù)實際機器和樣本選擇信號最強的波長。
具有檢測增益參數(shù)（PMT，Parameters）的通常設(shè)置為中或高。
使用bottom read讀數(shù)和top read讀數(shù)均可，基于不同的細胞模型，建議在預(yù)實驗時兩種讀數(shù)模式均嘗試下，看哪種的趨勢更加明顯。
關(guān)于氧氣封閉液使用：
氧氣封閉液可以用移液器吸取添加，添加時需要沿著培養(yǎng)板壁慢慢加入，使其順板壁向下流到培養(yǎng)基表面。
也可以直接用滴瓶滴加，倒轉(zhuǎn)預(yù)熱的滴管瓶并輕輕施加壓力，使封閉液足以充注瓶尖。 每個孔滴兩滴，使每個液滴在孔側(cè)面順應(yīng)向下流到培養(yǎng)基表面。
使用移液器添加封閉液時，可將黃色吸頭的嘴部用鋒利的刀片或剪刀修剪處理。將豎直吸頭離尖端3-4 mm處45°角修剪處理。
取下滴管瓶內(nèi)嘴蓋，輕輕吸取預(yù)熱的氧氣封閉液。避免上下吹吸形成氣泡。
關(guān)于細胞培養(yǎng)：
對于貼壁細胞，在200 μL培養(yǎng)基中的96孔板中接種細胞。在37°C的CO2培養(yǎng)箱中孵育過夜。
對于懸浮細胞，在檢測當天在100 μL培養(yǎng)基中接種。
注意所需的接種密度取決于細胞類型。 我們推薦進行細胞接種密度預(yù)實驗以確定最佳密度。通常從高細胞密度（通常為60,000）開始，每孔的最佳細胞數(shù)一般為：貼壁細胞每孔80,000個細胞，懸浮細胞每孔5-6 x 105（96孔板）。
檢測待測樣品都設(shè)置3復孔。
注意始終在每個96孔板上留出至少6個孔，以免添加細胞作為空白對照和信號控制孔。
1. 準備細胞模型。
2. 培養(yǎng)好的待檢測細胞移除培養(yǎng)基，用PBS洗滌細胞。
3. 加入100 μL新鮮培養(yǎng)基。
4. 加入4 μL R01氧熒光探針，充分混勻。
5. （可選）可以在此處添加待測試化合物（通常為1-10μL）（如果需要的話）。
6. 每孔加入100 μL氧氣封閉液。
7. 然后用該細胞板進行熒光細胞外O2消耗變化情況檢測。
激發(fā)波長455 nm - 468 nm，發(fā)射波長603 nm。測定熒光強度，每2分鐘或3分鐘讀取一次。
8. 繪制耗氧率曲線。
9. 計算每個樣品的斜率值。
常見問題分析
1.耗氧率檢測趨勢跟預(yù)期的不一致？
可以從以下方面改善：
檢查細胞接種和移液的一致性。
增加細胞密度。
將測定體積減少到60微升。
在某些較短的檢測時間區(qū)間內(nèi)，會出現(xiàn)熒光數(shù)據(jù)的波動情況，出現(xiàn)斜率下降或不變化，需要擴大到更長的時間范圍內(nèi)來分析耗氧率趨勢。一般檢測時間范圍不少于30分鐘。
溫度對檢測有較大影響。有條件的話，務(wù)必使用配有溫度控制的酶標儀，儀器以及所有培養(yǎng)基和儲備溶液均須使用前37℃預(yù)熱。注意某些讀板器的溫度控制不一致，如果存在這種情況，請考慮將測定和平衡溫度降低到30℃，避開外圈。
2.使用的細胞類型靈敏度不夠？
可以考慮以下改善方案：
增加酶標儀的增益（PMT）設(shè)置。
在無酚紅或無血清的情況下測定。
增加 R01氧熒光探針的體積（至10 μL/孔）。
減少 R01氧熒光探針的體積（至2 μL/孔）。
增加細胞密度。
將測定體積減少到60微升。
測量底部讀數(shù)（如果有）。
調(diào)整焦距。
可以從以下方面改善：
檢查細胞接種和移液的一致性。
增加細胞密度。
將測定體積減少到60微升。
在某些較短的檢測時間區(qū)間內(nèi)，會出現(xiàn)熒光數(shù)據(jù)的波動情況，出現(xiàn)斜率下降或不變化，需要擴大到更長的時間范圍內(nèi)來分析耗氧率趨勢。一般檢測時間范圍不少于30分鐘。
溫度對檢測有較大影響。有條件的話，務(wù)必使用配有溫度控制的酶標儀，儀器以及所有培養(yǎng)基和儲備溶液均須使用前37℃預(yù)熱。注意某些讀板器的溫度控制不一致，如果存在這種情況，請考慮將測定和平衡溫度降低到30℃，避開外圈。
2.使用的細胞類型靈敏度不夠？
可以考慮以下改善方案：
增加酶標儀的增益（PMT）設(shè)置。
在無酚紅或無血清的情況下測定。
增加 R01氧熒光探針的體積（至10 μL/孔）。
減少 R01氧熒光探針的體積（至2 μL/孔）。
增加細胞密度。
將測定體積減少到60微升。
測量底部讀數(shù)（如果有）。
調(diào)整焦距。
我要詢價
*聯(lián)系方式：
(可以是QQ、MSN、電子郵箱、電話等，您的聯(lián)系方式不會被公開)
*內(nèi)容：
