1.請立即檢查包裝袋是否有破損或漏液
2.請立即將細胞培養(yǎng)瓶從包裝盒中取出,并按照下方操作步驟進行培養(yǎng)傳代
注意:如為凍存管,請收到后立即解凍培養(yǎng)。若來不及解凍,請儲存于液氮中(存儲于負80度,會降低細胞存活率)
培養(yǎng)瓶中細胞操作步驟
對于懸浮培養(yǎng)的細胞,寄送前,我們會將培養(yǎng)基充滿整個培養(yǎng)瓶,以減少產(chǎn)品運輸過程中細胞所受震蕩。
1.收到細胞產(chǎn)品后,請注意觀察是否有污染。將培養(yǎng)瓶置于倒置顯微鏡下仔細檢查是否渾濁、是否細菌污染。
2.將培養(yǎng)瓶豎直放置于37℃培養(yǎng)箱中直至溫度平衡,隨后,在生物安全柜中,轉(zhuǎn)移培養(yǎng)瓶中的細胞至離心管中,離心200xg/5-10 min,去除上清后,用5mt培養(yǎng)基吹散細胞。
3.對上述細胞懸液進行細胞計數(shù)及活力檢測,調(diào)整細胞密度至2-3x10' cells/mL,并轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)瓶中。
4.將培養(yǎng)瓶豎直放置于含有5% CO,的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。如果細胞達到傳代培養(yǎng)的密度,則進行傳代培養(yǎng)。
凍存細胞操作步驟
注意:為保存細胞的高存活率,請收到產(chǎn)品后,立即解凍培養(yǎng),1.將凍存管置于37℃ 水浴中來回晃動,迅速解凍。為避免污染確保凍存管口置于水面之上。解凍需迅速,大約2分鐘。2.一旦凍存管中液體融化后,立即取出,采用 70%酒精噴拭凍存管表面。從此步開始,后續(xù)操作須在生物安全柜中完成。3.將凍存管中的液體轉(zhuǎn)移到含有5ml完全培養(yǎng)基的離心管中,離心200xg/5-10 min,用真空泵去除含有凍存液的上清。4.用完全培養(yǎng)基重新懸浮細胞并轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶中。為保證細胞復蘇的存活率,請將培養(yǎng)基在37℃水浴預熱后使用。5.將細胞置于含有5%CO,的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。