*0F` Chemically Competent Cell

產(chǎn)品編號：G100031
產(chǎn)品類別：質(zhì)粒菌種感受態(tài)
檢測樣本：細菌

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100μl/支

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*0F`: 100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl): 10μl

基因型

F´{lacI^q Tn10 (Tet^R)} mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) Φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 araD139 Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL endA1 nupG

*0F` Chemically Competent Cell產(chǎn)品說明

*0F`菌株來源于*0菌株。將F`{lacIq Tn10 (Tet^R)}因子轉(zhuǎn)入*0菌株，即為*0F`。該F`因子攜帶lacI^q 抑制子，可抑制trc，tac，lac等啟動子下游基因的表達，從而可以用于一些表達毒性蛋白質(zhì)粒的擴繁。recA1和endA1的突變有利于插入DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取�？捎糜跇�(gòu)建克隆，藍白斑篩選（如用于藍白斑篩選，需在培養(yǎng)基中加入IPTG誘導(dǎo)的表達）實驗，具有四環(huán)素抗性。*0F`感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率>10⁸cfu/μg DNA。

操作方法

1. *0F`感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA (質(zhì)�；蜻B接產(chǎn)物) 并用手打EP管底輕輕混勻，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少13 h。

注意事項

1. 感受態(tài)細胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉(zhuǎn)化效率。

2. 混入質(zhì)�；蜻B接產(chǎn)物時應(yīng)輕柔操作。

3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)�；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少終用于涂板的菌量。