注 意 :正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義:
白蛋白由肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞合成,在血漿蛋白中含量最多,具有重要的生理功能,包括維持膠體滲透壓,并可與長(zhǎng)鏈脂肪酸、膽汁酸、膽紅素、血紅素、鈣和鎂離子等物質(zhì)結(jié)合。它擁有抗氧化性和抗凝血性,能充當(dāng)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和藥物的運(yùn)輸載體,同時(shí)也是血漿PH值的緩沖劑。血清白蛋白含量直接關(guān)系到肝臟疾病、腎臟疾病、營(yíng)養(yǎng)不良或蛋白流失性腸道病癥的發(fā)生發(fā)展,是臨床檢測(cè)的一個(gè)重要指標(biāo)。
測(cè)定原理:
白蛋白在pH4.2的緩沖液中帶正電荷,可與帶負(fù)電荷的染料溴甲酚綠結(jié)合形成藍(lán)綠色復(fù)合物,在波長(zhǎng)630nm處有吸收峰,在一定范圍內(nèi)其顏色深淺與白蛋白濃度成正比例。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、1mL玻璃比色皿、蒸餾水。
劑組成和配制:
試劑一:液體50mL×1瓶,4℃保存。
標(biāo)準(zhǔn)品:液體0.5mL×1瓶,4℃保存。
樣品處理:
1. 血清:直接檢測(cè)。
2. 尿液:直接檢測(cè)。
測(cè)定操作表:
| 空白管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 測(cè)定管 |
蒸餾水(μL) | 10 |
|
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標(biāo)準(zhǔn)品(μL) |
| 10 |
|
樣本(μL) |
|
| 10 |
試劑一(μL) | 1000 | 1000 | 1000 |
混勻,25℃靜置1min,于1mL玻璃比色皿,空白管調(diào)零,測(cè)定630nm處吸光值A。分別記為A標(biāo)準(zhǔn)管和A測(cè)定管 |
計(jì)算公式:
白蛋白濃度(mg/mL)= A測(cè)定管÷A標(biāo)準(zhǔn)管×C標(biāo)準(zhǔn)管
=5×A測(cè)定管÷A標(biāo)準(zhǔn)管
C標(biāo)準(zhǔn)管:5mg/mL
注意事項(xiàng):
1. 靜置1min后盡快完成測(cè)定,以免引起非特異性呈色反應(yīng)。
2. 線性范圍為2mg/mL-40mg/mL。