尿微量白蛋白測定試劑盒(免疫比濁法)測定原理:
在酸性介質(zhì)中,CBB 與蛋白質(zhì)的 NH3+基團結合引起由棕色到蘭色的顏色變化,在 595nm 處有最大吸收峰。
試劑組成:
試劑一:CBB 試劑 60mL×1 瓶, 4℃保存。用時按 CBB 試劑:蒸餾水=1∶4 比例(即 5 倍稀釋)配制成 CBB 應用液,現(xiàn)用現(xiàn)配。
試劑二:524mg/L 蛋白標準液 0.5mL×1 支,4℃可保存 1 個月(-20℃冷凍保存,可存放 6 個月)。
三、所需儀器及試劑:
可見光分光光度計及 1cm 光徑比色皿(或酶標儀(595nm)及 96 孔板),渦旋混勻器,蒸餾水。
注意點:
1、樣本蛋白濃度過低時可適當加大取樣量(如取樣 0.1 或 0.2mL,同時標準品應稀釋 2 倍或 4 倍后和樣本量體積一致,計算時標準品濃度除以相應的稀釋倍數(shù)后再代入計算),而 CBB 應用液量不變;
2、測定管 OD 值過高時(測定 OD 減去空白 OD 后的差值比標準 OD 減空白 OD 的差值的 2 倍還大的)要將樣本用生理鹽水作一定稀釋后(稀釋后選擇測定 OD 值接近標準 OD 值對應的稀釋倍數(shù))再測;
3、本試劑盒也可用酶標儀來讀數(shù)(如在反應液靜置 5 分鐘后從每管中各取 0.2mL 到 96 孔板中(注意不要加入氣泡),595nm 處讀數(shù)),計算公式不變。
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