傳代方法 | 第一次建議1:2傳代 | 凍存條件 | 細(xì)胞庫(kù)無血清凍存液 |
細(xì)胞描述 | 該細(xì)胞系培養(yǎng)所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基為 DMEM/F12,配置完全培養(yǎng)基時(shí)需加入 10%FBS, 10ng/mL EGF,1%Anti-Anti 本庫(kù)的細(xì)胞僅用于科研工作,未經(jīng)許可不得用于其他目的,使用者不得將本庫(kù)細(xì)胞轉(zhuǎn)讓給第三者。 | ||
培養(yǎng)備注 | 用無菌離心管收集瓶子培養(yǎng)基,留作過渡培養(yǎng) |
培養(yǎng)瓶中細(xì)胞操作步驟
對(duì)于貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞,寄送前,我們會(huì)將培養(yǎng)基充滿整個(gè)培養(yǎng)瓶,以減少產(chǎn)品運(yùn)輸過程中貼壁細(xì)胞的脫落。
1. 收到細(xì)胞產(chǎn)品后,請(qǐng)注意觀察是否有污染。將培養(yǎng)瓶置于倒置顯微鏡下仔細(xì)檢查是否渾濁、是否細(xì)菌污染。因在運(yùn)輸過程中存在顛簸,且有些細(xì)胞對(duì)溫度變化也很敏感,可能存在一些細(xì)胞脫落漂浮的情況,這些細(xì)胞仍是活細(xì)胞,請(qǐng)勿丟棄,可離心富集后傳代使用。
2. 對(duì)于貼壁的細(xì)胞,在生物安全柜環(huán)境中,用真空泵去除培養(yǎng)瓶中的多余培養(yǎng)基,至剩余5-8mL左右,隨后將細(xì)胞置于含有5%CO的37℃恒溫 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),擰松瓶蓋。如果細(xì)胞已經(jīng)長(zhǎng)滿培養(yǎng)瓶請(qǐng)立即傳代。
3. 對(duì)于懸浮的細(xì)胞,在生物安全柜環(huán)境中,轉(zhuǎn)移培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞至離心管中,離心200×g / 5 - 10 min,去除上清后,用5 mL培養(yǎng)基吹散細(xì)胞,轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)瓶中,隨后置于含有5% CO 的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
凍存細(xì)胞操作步驟
注意:為保存細(xì)胞的高存活率,請(qǐng)收到產(chǎn)品后,立即解凍培養(yǎng)。
1.將凍存管置于37℃ 水浴中來回晃動(dòng),迅速解凍。為避免污染,確保凍存管口置于水面之上。解凍需迅速,大約2分鐘。
2. 一旦凍存管中液體融化后,立即取出,采用 70%酒精噴拭凍存管表面。從此步開始,后續(xù)操作須在生物安全柜中完成。
3.將凍存管中的液體轉(zhuǎn)移到含有5mL完全培養(yǎng)基的離心管中, 離心
4. 用完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞并轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶中。為保證細(xì)胞復(fù)蘇的存活率,請(qǐng)將培養(yǎng)基在37℃水浴預(yù)熱后使用將細(xì)胞置于含有5%CO 的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
貼壁細(xì)胞傳代培養(yǎng)
1. 吸取并棄掉培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基,加入PBS清洗一次。
2. 加入 1.0 mL 0.25(w/v)Trypsin-0.53mM EDTA溶液,并置于37℃培養(yǎng)箱中孵育,直至細(xì)胞從壁上脫落分離。此過程大約需要3至5分鐘(此處為12.5 cm2培養(yǎng)瓶所用體積,可根據(jù)實(shí)際情況增減用量)。
3. 加入2mL完全培養(yǎng)基中和胰蛋白酶,并輕輕吹打?qū)⒓?xì)胞從培養(yǎng)瓶表面吹落,并使細(xì)胞分散。
4. 離心
5. 將細(xì)胞置于含有5%
傳代比例:建議 1:2 (以培養(yǎng)瓶底面積計(jì)算)
培養(yǎng)基換液: 每隔 2 至 3 天。