使用方法
1、您收到細胞后，請按照以下方法進行操作：取出細胞培養(yǎng)瓶，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置2-3小時以穩(wěn)定細胞狀態(tài)，然后離心換用新鮮完全培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進行傳代。2、細胞傳代：待細胞達到一定密度（不超過1x10^6/ml）可按照以下方法換液培養(yǎng)或傳代。方法①：收集細胞，1000rpm離心5min，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。方法②：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。貼壁細胞需要用胰酶進行消化。3、細胞凍存：1）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；2）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，并放置于凍存管中；3）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉(zhuǎn)入液氮中進行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。4、細胞復蘇：1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結(jié)晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；2）將凍存管中的細胞移至含10ml完全培養(yǎng)基的15ml離心管中， 1000rpm離心5min；3）棄上清，沉淀用5ml完全培養(yǎng)基重懸，接種25cm2培養(yǎng)瓶，于37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；4）第二天，換用新鮮完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。注：懸浮細胞運輸中會有少些細胞因為碰撞裂解產(chǎn)生碎片，收到細胞如碎片較多時，胎牛血清可以用15%培養(yǎng)三天，利于細胞盡快恢復狀態(tài)，細胞穩(wěn)定后再調(diào)回10%即可。
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