細(xì)胞名稱：H9
細(xì)胞描述：人胚胎干細(xì)胞，曾用名WA09
形 態(tài)：球形克隆，貼壁生長
來源性別：女性
組織：內(nèi)細(xì)胞團
凍存日期/代數(shù)：詳見 凍存管/培養(yǎng)瓶 標(biāo)識
建議復(fù)蘇培養(yǎng)體系：1 個 T25 培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿
細(xì)胞狀態(tài)：良好
支原體檢測結(jié)果：陰性
細(xì)胞用途：僅供科研使用。
STR鑒定結(jié)果：
Amelogenim：X
D5S818：11，12
D13S317：9
D7S820：9，11
D16S539：12，13
vWA：17
THO1：9
TPOX：10,11
CSF1PO：11
H9細(xì)胞完全培養(yǎng)基培養(yǎng)人胚胎干細(xì)胞
1.試劑和材料
H9細(xì)胞完全培養(yǎng)基試劑盒
成分
規(guī)格
數(shù)量
儲存條件
H9細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基
500mL
1瓶
2-8℃
H9細(xì)胞培養(yǎng)基添加劑
5mL復(fù)溶
1支
-20℃
所需的其它試劑和材料
產(chǎn)品
規(guī)格
Y27632
1mg
Matrix
5mL
H9細(xì)胞消化液
500mL
另需細(xì)胞培養(yǎng)皿/瓶/板，15mL離心管和移液管等細(xì)胞培養(yǎng)耗材
2.培養(yǎng)流程
2.1.復(fù)蘇
在開始復(fù)蘇前，將所有試管、預(yù)熱后的培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿準(zhǔn)備好，已確保盡快完成復(fù)蘇過程。
1. 將凍存管從液氮中取出，快速在37℃水浴槽中解凍，輕柔持續(xù)地?fù)u動凍存管，直到只剩下一個小冷凍團。從水浴槽取出凍存管，70%乙醇擦拭進(jìn)行消毒。
2. 使用移液管將凍存管中含有H9細(xì)胞的凍存液輕輕轉(zhuǎn)移至一個含有5-6mL已經(jīng)預(yù)熱的完全培養(yǎng)基的15mL離心管中，過程必須輕柔防止吹散細(xì)胞團。
3. 室溫300g離心5min。
4. 吸出培養(yǎng)基，確保細(xì)胞團完整。
5. 然后緩慢加入1mL完全培養(yǎng)基，用手指輕彈離心管底部，使細(xì)胞團脫離底部并分散。
6. 輕輕的將此1mL細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至已包被的培養(yǎng)皿/板/瓶，根據(jù)最終培養(yǎng)細(xì)胞的液體體積，加入ROCK inhibitor Y27632，終濃度為10μM。
7. 將培養(yǎng)皿/板/瓶置于37℃培養(yǎng)箱中，每天更換培養(yǎng)基（換液不需要再添加Y27632，但培養(yǎng)基需提前預(yù)熱）。
2.2.傳代
當(dāng)集落變得較大、中心變得密集、明亮（對比邊緣），相鄰的集落開始融合時，此時可進(jìn)行傳代。
1. 傳代前， 準(zhǔn)備 37 ℃預(yù)熱好的好無鈣鎂 PBS 溶液及消化液，完全培養(yǎng)基。
2. 吸走上清，并加入 37℃預(yù)熱好的 PBS 溶液清洗1次。
3. 加入適量（按 6 孔板每孔加 1ml，6cm 皿加 2ml，10cm 皿加 3ml 的量）的 37℃預(yù)熱好的消化液。
4. 37℃放置1-2min，用手指輕彈皿/板/瓶身，顯微鏡下觀察到大部分克隆邊緣開始脫離培養(yǎng)皿/板底，克隆內(nèi)部大部分細(xì)胞成團脫落。
5. 加入適量的完全培養(yǎng)基終止消化。
6. 移入離心管，300g離心5min，
7. 離心后重懸（重懸步驟參照復(fù)蘇4-5步）。
8. 傳代比例為 1：6—1：8，根據(jù)最終培養(yǎng)細(xì)胞的液體體積，加入ROCK inhibitor Y27632，終濃度為10μM。
9. 將培養(yǎng)皿/板/瓶置于37℃培養(yǎng)箱中，每天更換培養(yǎng)基（換液不需要再添加Y27632，但培養(yǎng)基需提前預(yù)熱）。
2.3.凍存
當(dāng)集落變得較大、中心變得密集、明亮（對比邊緣），相鄰的集落開始融合時，此時可進(jìn)行傳代。
1. 傳代前， 準(zhǔn)備 37 ℃預(yù)熱好的好無鈣鎂 PBS 溶液及消化液，完全培養(yǎng)基。
2. 吸走上清，并加入 37℃預(yù)熱好的 PBS 溶液清洗1次。
3. 加入適量（按 6 孔板每孔加 1ml，6cm 皿加 2ml，10cm 皿加 3ml 的量）的 37℃預(yù)熱好的消化液。
4. 37℃放置1-2min，用手指輕彈皿/板/瓶身，顯微鏡下觀察到大部分克隆邊緣開始脫離培養(yǎng)皿/板底，克隆內(nèi)部大部分細(xì)胞成團脫落。
5. 加入適量的完全培養(yǎng)基終止消化。
6. 移入離心管，300g離心5min。
7. 離心后重懸（重懸步驟參照復(fù)蘇4-5步）。
8. 使用預(yù)冷的凍存液輕輕的重懸細(xì)胞團，然后將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至凍存管，凍存按 6 孔板每孔凍 1 支，6cm 皿凍 2-4 支，10cm 皿凍 6-12 支（凍存液為：90%H9細(xì)胞完全培養(yǎng)基與 10%的DMSO。
注意事項1.收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。
2.收到細(xì)胞先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時（視細(xì)胞密度而定）穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收細(xì)胞時就整體外觀拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài)，100*，200*各一張），觀察記錄細(xì)胞在運輸過程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷售依據(jù)。
3.由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊�，故本公司只保證客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài)，故客戶需要售后時需出示收到細(xì)胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時間證明，期間間隔時間不能大于7天。
4.所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
