傳代方法	1:2傳代
傳代情況	2~3天換液
培養(yǎng)體系	溫度：37℃ ；  氣相：空氣，95%；CO2，5%
細(xì)胞描述	本庫的細(xì)胞僅用于科研工作，未經(jīng)許可不得用于其他目的，使用者不得將本庫細(xì)胞轉(zhuǎn)讓給第三者。
凍存條件	完全培養(yǎng)基50%+40%FBS+10%DMSO，液氮

二、細(xì)胞收到后處理

細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是細(xì)胞運(yùn)輸?shù)淖詈棉k法。

收到細(xì)胞回到自己的實(shí)驗(yàn)室后，先打開外包裝，用 75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超凈臺內(nèi)，

嚴(yán)格無菌操作，培養(yǎng)箱靜置 2-4 小時(shí)。鏡下觀察：未超過 80%匯合度時(shí)，可將瓶裝的完全培

養(yǎng)液收集至離心管中，加入 6ml 完全培養(yǎng)基，放入 37℃、5%CO2 孵箱培養(yǎng)；超過 80%匯合度

時(shí)，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。（注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話，

放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松）

三、細(xì)胞培養(yǎng)步驟

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入 5mL 培養(yǎng)基

混合均勻。在 1000RPM 條件下離心 5 分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 4-6mL 完全培養(yǎng)基后吹勻。然

后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入 6cm 皿中），培養(yǎng)過夜。第二

天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

1、對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

1.

棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。

2.

加 1-2ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培養(yǎng)箱中消化

1-2min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，

輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加 5ml 以上含 10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打細(xì)胞，完全脫落后吸出，在 1000RPM 條件下離心 8-10 分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加

1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 按 5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液，將細(xì)胞懸液按 1：2 的比例分到新的含 5-6 ml 培養(yǎng)液的新皿中

或者瓶中。

PS：若客戶收到 2ml 小管細(xì)胞，收到細(xì)胞后，用 75%酒精噴灑整個(gè)管子消毒后放到超凈臺或

安全柜內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作；將小管細(xì)胞轉(zhuǎn)移至 T25 培養(yǎng)瓶或 6cm 培養(yǎng)皿，加入 5ml 左右完

 

備注

用無菌離心管收集瓶子培養(yǎng)基，留作過渡培養(yǎng)

- 2 -

全培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細(xì)胞密度：若密度未超過 80%，換液繼續(xù)培養(yǎng)，

視情況傳代或者凍存。若密度超過 80%，可直接進(jìn)行傳代（方法同上）。

3）細(xì)胞凍存：

1、細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時(shí)，棄 25cm2 培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細(xì)胞一

次；2、添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變

圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，

1000rpm 離心 5min；

3、用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中；

4、先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃。

售后服務(wù)告知書

一、收到細(xì)胞處理方法

1. 收到細(xì)胞先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置若干小時(shí)（視細(xì)胞密度而定）穩(wěn)

定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收

細(xì)胞時(shí)就整體外觀拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下

細(xì)胞狀態(tài)，100×，200×各一張），觀察記錄細(xì)胞在運(yùn)輸過程中是否有污染情況。作為我方

進(jìn)行售后的依據(jù)。

2.

收到細(xì)胞未開封，出現(xiàn)污染狀況我們負(fù)責(zé)免費(fèi)重發(fā)一次細(xì)胞。

3.

由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運(yùn)輸?shù)榷喾矫嬉蛩氐挠绊�，故本公司只保證客戶收到細(xì)胞

后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài)，故客戶需要售后是需出示收到細(xì)胞的時(shí)間證明及客戶提供收貨時(shí)間和

發(fā)現(xiàn)問題后與客服人員溝通的時(shí)間證明，期間間隔時(shí)間不能大于 7 天。

4. 如客戶對細(xì)胞的種類、純度、活性等特性有疑問，需提供相應(yīng)的生物學(xué)實(shí)驗(yàn)檢測結(jié)果作

為依據(jù)。

二、細(xì)胞出現(xiàn)問題，可重發(fā)的情況有哪些？判定標(biāo)準(zhǔn)是什么？

1.

細(xì)胞運(yùn)輸途中遭遇的各種問題，細(xì)胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等，重發(fā)；

2.

細(xì)胞污染問題，請?jiān)谑盏疆a(chǎn)品 48 小時(shí)內(nèi)，給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，核實(shí)后重發(fā)；

3.

常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置 24 小時(shí)后，干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇后 24 小時(shí)后，絕大多數(shù)細(xì)胞

未存活，（需提供真實(shí)清晰的細(xì)胞狀態(tài)照片），重發(fā)；

4. 干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇后 24 小時(shí)后或常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置 4 小時(shí)候并且未開封，出現(xiàn)

污染，重發(fā)；

5. 細(xì)胞活性問題，請?jiān)谑盏疆a(chǎn)品 7 天內(nèi)給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，用臺盼藍(lán)染色法鑒定

細(xì)胞活力，核實(shí)后予重發(fā)；

6. 細(xì)胞收到當(dāng)天以及第 2,3 天請拍照，3 天未告知的，視為產(chǎn)品合格。4-7 天內(nèi)出現(xiàn)問題有

提供收到細(xì)胞前 3 天照片和細(xì)胞出現(xiàn)問題時(shí)照片以及細(xì)胞相關(guān)操作的詳細(xì)步驟的，并跟技術(shù)

人員溝通的，由技術(shù)人員判定為我方責(zé)任的，重發(fā)。技術(shù)人員判定為雙方承擔(dān)責(zé)任的由雙方

進(jìn)行協(xié)商處理或者按合同價(jià)的 50%收費(fèi)重發(fā)。

三、細(xì)胞出現(xiàn)問題，不予以重發(fā)的情況有哪些？

1.

客戶造成細(xì)胞污染，不重發(fā)；

2.

客戶不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；

3.

非本庫推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；

4.

細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供細(xì)胞培養(yǎng)前 3 天照片的，不重發(fā)

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5.

細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理的，不重發(fā)；

6.

細(xì)胞收到 2 天內(nèi)，未告知，不重發(fā)；

7.

視具體情況而定。