細胞名稱：DYR0100
細胞描述：將人包皮細胞誘導成 iPS 細胞，通過重編程轉(zhuǎn)錄因子為：OCT4、SOX2、KLF4、MYC 誘導建立 iPS 細胞，培養(yǎng)時無需飼養(yǎng)層細胞。
形 態(tài)：球形克隆
來源性別：男性疾 �。航】�
年 齡：新生兒
細胞來源：從 ATCC 引進（http://www.atcc.org/）
ATCC number: ACS-1011TM
凍存日期/代數(shù)：詳見 凍存管/培養(yǎng)瓶 標識建議復蘇培養(yǎng)體系：1 個 T25 培養(yǎng)瓶
細胞狀態(tài)：良好
支原體檢測結(jié)果：陰性
細胞用途：僅供科研使用。
STR鑒定結(jié)果
D5S818
11
11
D13S317
11
13
D7S820
9
10
D16S539
12
12
VWA
14
19
TH01
9.3
9.3
AMEL
X
Y
TPOX
8
11
CSF1PO
7
11
D12S391
18
19.3
FGA
21
22
D2S1338
17
19
iPS細胞完全培養(yǎng)基培養(yǎng)人誘導型多能干細胞
1.試劑和材料
iPS細胞完全培養(yǎng)基試劑盒
成分
規(guī)格
數(shù)量
儲存條件
iPS細胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基
500mL
1瓶
2-8℃
iPS細胞培養(yǎng)基添加劑
20mL
1支
-20℃
所需的其它試劑和材料
產(chǎn)品
規(guī)格
貨號
品牌
Y27632
1mg
iPSMed-iCell-CA005
iCell
Matrix
5mL
iPSMed-iCell-CA004
iCell
iPS細胞消化液
500mL
iPSMed-iCell-CA003
iCell
另需細胞培養(yǎng)皿/瓶/板，15mL離心管和移液管等細胞培養(yǎng)耗材
2.培養(yǎng)流程
2.1.復蘇
在開始復蘇前，將所有試管、預熱后的培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿準備好，已確保盡快完成復蘇過程。
將凍存管從液氮中取出，快速在37℃水浴槽中解凍，輕柔持續(xù)地搖動凍存管，直到只剩下一個小冷凍團。從水浴槽取出凍存管，70%乙醇擦拭進行消毒。
使用移液管將凍存管中含有iPS細胞的凍存液輕輕轉(zhuǎn)移至一個含有5-6mL已經(jīng)預熱的完全培養(yǎng)基的15mL離心管中，過程必須輕柔防止吹散細胞團。
室溫300g離心5min。
吸出培養(yǎng)基，確保細胞團完整。
然后緩慢加入1mL完全培養(yǎng)基，用手指輕彈離心管底部，使細胞團脫離底部并分散。
輕輕的將此1mL細胞懸液轉(zhuǎn)移至已包被的培養(yǎng)皿/板/瓶，根據(jù)最終培養(yǎng)細胞的液體體積，加入ROCK inhibitor Y27632，終濃度為10μM。
將培養(yǎng)皿/板/瓶置于37℃培養(yǎng)箱中，每天更換培養(yǎng)基（換液不需要再添加Y27632，但培養(yǎng)基需提前預熱）。
2.2.傳代
當集落變得較大、中心變得密集、明亮（對比邊緣），相鄰的集落開始融合時，此時可進行傳代。
傳代前， 準備 37 ℃預熱好的好無鈣鎂 PBS 溶液及消化液，完全培養(yǎng)基。
吸走上清，并加入 37℃預熱好的 PBS 溶液清洗1次。
加入適量（按 6 孔板每孔加 1ml，6cm 皿加 2ml，10cm 皿加 3ml 的量）的 37℃預熱好的消化液。
37℃放置1-2min，用手指輕彈皿/板/瓶身，顯微鏡下觀察到大部分克隆邊緣開始脫離培養(yǎng)
皿/板底，克隆內(nèi)部大部分細胞成團脫落。
加入適量的完全培養(yǎng)基終止消化。
移入離心管，300g離心5min，
離心后重懸（重懸步驟參照復蘇4-5步）。
傳代比例為 1：6—1：8，根據(jù)最終培養(yǎng)細胞的液體體積，加入ROCK inhibitor Y27632，終濃度為10μM。
將培養(yǎng)皿/板/瓶置于37℃培養(yǎng)箱中，每天更換培養(yǎng)基（換液不需要再添加Y27632，但培養(yǎng)基需提前預熱）。
2.3.凍存
當集落變得較大、中心變得密集、明亮（對比邊緣），相鄰的集落開始融合時，此時可進行傳代。
傳代前， 準備 37 ℃預熱好的好無鈣鎂 PBS 溶液及消化液，完全培養(yǎng)基。
吸走上清，并加入 37℃預熱好的 PBS 溶液清洗1次。
加入適量（按 6 孔板每孔加 1ml，6cm 皿加 2ml，10cm 皿加 3ml 的量）的 37℃預熱好的消化液。
37℃放置1-2min，用手指輕彈皿/板/瓶身，顯微鏡下觀察到大部分克隆邊緣開始脫離培養(yǎng)皿/板底，克隆內(nèi)部大部分細胞成團脫落。
加入適量的完全培養(yǎng)基終止消化。
移入離心管，300g離心5min。
離心后重懸（重懸步驟參照復蘇4-5步）。
使用預冷的凍存液輕輕的重懸細胞團，然后將細胞懸液轉(zhuǎn)移至凍存管，凍存按 6 孔板每孔凍 1 支，6cm 皿凍 2-4 支，10cm 皿凍 6-12 支（凍存液為：90% iPS細胞完全培養(yǎng)基與 10%的DMSO。
